Como determinar a concentração ideal?
Para o indutor IPTG (isopropil-beta-d-tiogalactosídeo), quanto maior a concentração, melhor.A concentração ideal depende das condições experimentais específicas e do efeito de indução desejado.
Geralmente, a concentração de IPTG é utilizada na faixa de 0,1-1 mM.Concentrações mais baixas podem reduzir os efeitos adversos no crescimento celular e podem reduzir a citotoxicidade devido à superexpressão de proteínas alvo.Concentrações mais elevadas podem causar carga metabólica celular excessiva, afetando o crescimento celular e a eficiência de expressão.
A forma de determinar a concentração ideal pode ser avaliar o nível de expressão da proteína alvo através da realização de testes de indução de IPTG em diferentes concentrações.Testes de cultura em pequena escala podem ser realizados utilizando uma gama de concentrações de IPTG (por exemplo, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) e o efeito de expressão em diferentes concentrações pode ser avaliado através da detecção do nível de expressão da proteína alvo (por exemplo, Western detecção de mancha ou fluorescência).De acordo com os resultados experimentais, a concentração com melhor efeito de expressão foi selecionada como a concentração ideal.
Além disso, você também pode consultar a literatura relevante ou a experiência de outros laboratórios para compreender a faixa de concentração de IPTG comumente usada sob condições experimentais semelhantes e, em seguida, otimizar e ajustar de acordo com as necessidades experimentais.
É importante notar que a concentração ideal pode variar dependendo dos diferentes sistemas de expressão, proteínas alvo e condições experimentais, por isso é melhor otimizar caso a caso.
Horário da postagem: 28 de setembro de 2023