4-Nitrofenil beta-D-galactopiranósido CAS:200422-18-0

Efeito: ONPG é um substrato usado especificamente para detectar a presença e atividade da enzima β-galactosidase.Quando a enzima β-galactosidase está presente e ativa, ela cliva o ONPG em dois produtos: o-nitrofenol e um derivado da galactose.A liberação de o-nitrofenol resulta em uma mudança de cor amarela, que pode ser medida por meio de um espectrofotômetro.

Aplicação: O ONPG tem diversas aplicações em pesquisas de biologia molecular e bioquímica:

Determinação da atividade da β-galactosidase: ONPG é comumente usado para medir e quantificar a atividade da enzima β-galactosidase.A taxa de formação de o-nitrofenol, que é diretamente proporcional à atividade enzimática, pode ser medida espectrofotometricamente.

Expressão e regulação gênica: ONPG é frequentemente utilizado em experimentos relacionados a estudos de expressão e regulação gênica.É frequentemente utilizado em ensaios de proteínas de fusão, como o sistema de fusão lacZ comumente utilizado, para estudar a expressão de genes sob o controle de promotores específicos.A atividade da beta-galactosidase medida usando ONPG fornece informações sobre o nível de expressão genética.

Triagem da atividade da β-galactosidase: O ONPG pode ser usado como método de triagem colorimétrica na tecnologia de DNA recombinante para identificar a presença e funcionalidade do gene LacZ, que codifica a β-galactosidase.Este método de triagem auxilia na identificação de clones que contêm o gene de interesse.

Estudos de cinética enzimática: ONPG também é útil no estudo da cinética da enzima β-galactosidase.Medindo a taxa de reação enzima-substrato em diferentes concentrações de substrato, é possível determinar parâmetros cinéticos como constantes de Michaelis-Menten (Km) e taxas máximas de reação (Vmax).