4-Nitrofenil beta-D-galactopiranosídeo CAS:200422-18-0

Efeito: O ONPG é um substrato usado especificamente para detectar a presença e a atividade da enzima β-galactosidase. Quando a enzima β-galactosidase está presente e ativa, ela cliva o ONPG em dois produtos: o-nitrofenol e um derivado de galactose. A liberação de o-nitrofenol resulta em uma mudança de cor para amarelo, que pode ser medida usando um espectrofotômetro.

Aplicação: O ONPG possui diversas aplicações em pesquisa de biologia molecular e bioquímica:

Determinação da atividade da β-galactosidase: O ONPG é comumente usado para medir e quantificar a atividade da enzima β-galactosidase. A taxa de formação de o-nitrofenol, que é diretamente proporcional à atividade da enzima, pode ser medida espectrofotometricamente.

Expressão e regulação gênica: O ONPG é frequentemente utilizado em experimentos relacionados a estudos de expressão e regulação gênica. É comumente empregado em ensaios de proteínas de fusão, como o sistema de fusão lacZ, para estudar a expressão de genes sob o controle de promotores específicos. A atividade da beta-galactosidase medida por meio do ONPG fornece informações sobre o nível de expressão gênica.

Triagem para atividade da β-galactosidase: O ONPG pode ser usado como um método de triagem colorimétrica em tecnologia de DNA recombinante para identificar a presença e a funcionalidade do gene LacZ, que codifica a β-galactosidase. Esse método de triagem auxilia na identificação de clones que contêm o gene de interesse.

Estudos de cinética enzimática: O ONPG também é útil no estudo da cinética da enzima β-galactosidase. Ao medir a velocidade da reação enzima-substrato em diferentes concentrações de substrato, é possível determinar parâmetros cinéticos como a constante de Michaelis-Menten (Km) e a velocidade máxima da reação (Vmax).