Existem muitos heróis anônimos ao nosso redor, que parecem comuns, mas na verdade contribuem silenciosamente muito para nós.A proteinase K é o “herói anônimo” na indústria de diagnóstico molecular, embora comparada com as “grandes e poderosas” da indústria, a proteinase K seja tão discreta que há muito negligenciamos sua importância.Com a eclosão da nova epidemia da coroa, a demanda por proteinase K disparou, e a oferta interna e externa está muito aquém do consumo, e todos de repente perceberam que a proteinase K é tão importante.
Qual é a utilidade da proteinase K?
A proteinase K é uma serina protease com atividade enzimática proteolítica e pode manter a atividade em uma ampla gama de ambientes (pH (4-12,5), tampão com alto teor de sal, alta temperatura de 70°C, etc.).Além disso, a atividade da proteinase K não é inibida por SDS, ureia, EDTA, cloridrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc., e uma certa quantidade de detergente também pode aumentar a atividade da proteinase K. No tratamento médico (vírus e desinfecção microbiana ), alimentos (amaciamento de carne), couro (amolecimento de cabelos), vinificação (clarificação de álcool), preparação de aminoácidos (penas degradadas), extração de ácidos nucléicos, hibridização in situ, etc., proteinase K Existem aplicações.A aplicação mais comumente usada é a extração de ácidos nucléicos.
A proteinase K pode enzimolizar todos os tipos de proteínas na amostra, incluindo aquelas histonas que estão fortemente ligadas aos ácidos nucleicos, de modo que os ácidos nucleicos possam ser liberados da amostra e liberados no extrato, facilitando a próxima etapa de extração e purificação.Na detecção de ácido nucleico viral, a proteinase K é um dos componentes importantes na solução de amostragem de vírus.A proteinase K pode quebrar e inativar a proteína capsidual do vírus, o que é mais seguro durante a fase de transporte e detecção;além disso, a proteinase K também pode degradar a RNase, previne a degradação do RNA viral e facilita a detecção de ácidos nucleicos.
A fama da noite para o dia da proteinase K
Seja no campo da pesquisa científica ou no campo do IVD, a extração de ácidos nucléicos é o experimento mais básico, por isso a proteinase K sempre foi uma existência muito importante.No entanto, no passado, a proteinase K era muito menos conhecida do que o seu papel.Grande parte disso ocorreu porque a relação de oferta e demanda de proteinase K era muito estável.Poucas pessoas pensariam que o fornecimento de proteinase K seria um problema.
Com o surto da nova epidemia da coroa, a procura por testes de ácido nucleico aumentou.No final de Junho de 2020, a China completou quase 90 milhões de novos testes de coroa, e este número é ainda mais alarmante à escala global.Em experimentos de extração de ácido nucleico, a concentração de trabalho de proteinase K é de cerca de 50-200 μg/mL.Geralmente, são necessários cerca de 100 μg de proteinase K para extrair uma amostra de ácido nucleico.Na utilização real, a fim de aumentar a eficiência da extracção de ácidos nucleicos, muitas vezes a Proteinase K será utilizada numa quantidade aumentada.A detecção de ácido nucleico do novo coronavírus trouxe uma grande demanda por proteinase K.O equilíbrio original de oferta e demanda de proteinase K foi rapidamente quebrado, e a proteinase K tornou-se um importante material de prevenção de epidemias da noite para o dia.
Dificuldades na produção de proteinase K
Embora com o desenvolvimento da epidemia, o importante valor da proteinase K tenha sido valorizado pelas pessoas, é embaraçoso que, devido ao baixo teor excessivo da proteinase K, poucas empresas nacionais tenham estado envolvidas na produção de proteinase K. Quando as pessoas deseja estabelecer a produção de proteinase K Durante o processo de produção, descobriu-se que a proteinase K é uma proteína extremamente especial.É extremamente desafiador expandir a capacidade de produção de proteinase K em um curto período de tempo.
A produção em larga escala de proteinase K enfrenta as seguintes dificuldades
1. Baixa expressão
A proteinase K pode degradar de forma não específica a maioria das proteínas e causar toxicidade grave à célula hospedeira de expressão.Portanto, o nível de expressão da proteinase K é geralmente muito baixo.A triagem de sistemas de expressão e cepas que expressam altamente proteinase K geralmente requer um ciclo mais longo.
2. Resíduos de pigmentos e ácidos nucléicos
A fermentação em grande escala introduz uma grande quantidade de pigmentos e resíduos de ácidos nucleicos do hospedeiro.É difícil remover essas impurezas com um processo de purificação simples, e a purificação complexa aumenta o custo e reduz a taxa de recuperação.
3. Instabilidade
A proteinase K não é suficientemente estável, pode enzimolizar-se e é difícil armazená-la de forma estável a 37°C por um longo período de tempo sem um agente protetor.
4. Fácil de precipitar
Ao preparar o pó liofilizado de proteinase K, para garantir que o conteúdo sólido de proteinase K no pó liofilizado seja grande, é necessário adicionar um agente protetor liofilizado em alta concentração, mas quando o concentração de proteinase K atinge 20mg/mL e acima, é fácil A agregação forma um precipitado, o que traz grandes dificuldades à liofilização de proteinase K com alto teor de sólidos.
5. Grande investimento
A proteinase K tem forte atividade de protease e pode hidrolisar outras proteases em laboratório.Portanto, a proteinase K requer áreas de produção especializadas, equipamentos e pessoal para pesquisa, desenvolvimento e produção.
Solução de proteinase K da XD BIOCHEM
XD BIOCHEM possui uma plataforma madura de expressão e purificação de proteínas e possui vasta experiência na expressão e purificação de proteínas recombinantes e otimização de processos de produção.Através da rápida formação de uma equipe de pesquisa e desenvolvimento, o processo de produção em larga escala da proteinase K foi superado.A produção mensal de pó liofilizado é superior a 30 kg.O produto tem desempenho estável, alta atividade específica de enzima e nenhum resíduo de citocromo e ácido nucleico do hospedeiro.Bem-vindo a entrar em contato com a XD BIOCHEM Obtenha um pacote de teste (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
As soluções técnicas da XD BIOCHEM incluem
Usando a integração de plasmídeos de múltiplas cópias, são selecionadas cepas de alta expressão com um nível de expressão de 8g/L, o que supera o problema do baixo nível de expressão da proteinase K.
Através do estabelecimento de um processo de purificação em várias etapas, o citocromo hospedeiro e os resíduos de ácido nucleico da proteinase K foram removidos com sucesso abaixo do valor padrão.
Através da triagem de alto rendimento de formulações de tampão protetor, foi selecionado um tampão que pode armazenar estavelmente proteinase K a 37°C.
Os tampões de triagem superam o problema de que a proteinase K é fácil de agregar e precipitar em altas concentrações e estabelecem as bases para a liofilização com alto teor de sólidos da proteinase K.
Amostra de proteinase K XD BIOCHEM
Teste de estabilidade da proteinase K XD BIOCHEM: não haverá alteração significativa na atividade após 80 dias à temperatura ambiente
Teste de estabilidade da proteinase K XD BIOCHEM: não haverá alteração significativa na atividade após 80 dias à temperatura ambiente.
Comparação do efeito de extração de ácido nucleico da XD BIOCHEM proteinase K e produtos concorrentes.No processo de extração de ácidos nucleicos, são utilizados XD BIOCHEM e proteinase K competitiva, respectivamente.A eficiência de extração da proteinase K XD BIOCHEM é maior e o valor Ct do gene alvo é menor.
Horário da postagem: 31 de dezembro de 2021